Zkouška dráždivosti chemických látek a kosmetických prostředků
in vitro na modelu lidské kůže "SkinEthic Skin Irritation" testem
Princip:
Test 42bis kožní dráždivosti na modelu SKINETHIC (42 minut aplikace testované látky + 42 hodin následná po-inkubace) je navržen k určení akutní kožní dráždivosti testovanou látkou. Tento validační protokol se řadí mezi nejvýznamnější a nejvíce využívané postupy testování dráždivých účinků na kůži.Využívaný model: RHE
Výhody:
Etické hledisko
Cílem této metody je vyhnout se zkouškám na laboratorních zvířatech, které jsou postupně zakazovány.
Využití vhodného standardizovaného modelu
Používaný model je z histologického hlediska totožný s lidskou epidermis. In vitro metodika umožňuje v porovnání s in vivo studiemi využívat takový systém, který umožňuje jednoznačné kvantitativní a reprodukovatelné výsledky.
Validovaná metoda
Interní vnitřní validace je validace metody v rámci jedné laboratoře. Externí (vnější) validace zahrnuje interní validaci společně s validací metody srovnáním výsledků metody z více laboratoří (tzv. mezilaboratorní porovnávací zkoušky) a zahrnuje výpočet reprodukovatelnosti metody.
Postup
Každá testovaná látka (testovaný materiál, pozitivní a negativní kontrola) je současně aplikována na tři repliky tkáně po dobu 42 min při pokojové teplotě (18°C až 24 °C). Po expozici testované látky je tkáň promyta PBS (fosfátový pufr) a mechanicky vysušena. Epidermis je pak přenesena do čerstvého média a inkubována při 37°C po dobu 42 hod. Životaschopnost buněk je stanovena inkubací tkání po 3 hod s 0.3 mL roztoku MTT (1 mg/1 mL). Krystalky formazanu jsou extrahovány 1.5 mL isopropanolu po 2 hod při pokojové teplotě a stanoveny spektrofotometricky při 540 nm. 5% SDS (sodium dodecyl sulfát) a PBS upravené epidermis jsou využívány jako pozitivní a negativní kontrola. U každé upravené tkáně je životaschopnost buněk vyjádřena jako procento průměru negativní kontrolní tkáně. Pokud má testovaná látka hodnotu pod 50% je považována za dráždivou.
Predikční model
Reference
Prohlášení o platnosti in vitro testů kožní dráždivosti.
