Zkouška leptavosti chemických látek a kosmetických prostředků in vitro na modelu lidské kůže "SkinEthic Skin Corrosion" testem

Test leptavých účinků na kůži na modelu SKINETHIC je navržen k určení akutního poleptání kůže testovanou látkou, a to měřením cytotoxického účinku, což je prováděno MTT testem na rekonstruovaném lidském modelu kůže (RHE).

Využívaný model: RHE

Výhody:

Etické hledisko

Cílem této metody je vyhnout se zkouškám na laboratorních zvířatech, které jsou postupně zakazovány.

Využití vhodného standardizovaného modelu

Používaný model je z histologického hlediska totožný s lidskou epidermis. In vitro metodika umožňuje v porovnání s in vivo studiemi využívat takový systém, který umožňuje jednoznačné kvantitativní a reprodukovatelné výsledky.

Validovaná metoda

Interní vnitřní validace je validace metody v rámci jedné laboratoře. Externí (vnější) validace zahrnuje interní validaci společně s validací metody srovnáním výsledků metody z více laboratoří (tzv. mezilaboratorní porovnávací zkoušky) a zahrnuje výpočet reprodukovatelnosti metody.

Postup

Každá testovaná látka (testovaný materiál, pozitivní a negativní kontrola) je současně aplikována na tři repliky tkáně po dobu 3 min, 1 hod a pokud je to nutné tak také po dobu 4 hod při pokojové teplotě. Po expozici testované látky je tkáň promyta PBS (fosfátový pufr) a mechanicky vysušena. Životaschopnost buněk je stanovena inkubací tkání po 3 hod s 0.3 mL roztoku MTT (1 mg/1 mL). Krystalky formazanu jsou extrahovány 1.5 mL isopropanolu po 2 hod při pokojové teplotě a stanoveny spektrofotometricky při 540 nm. Hydroxid draselný 8N (8N KOH) a destilovaná voda upravené epidermis jsou využívány jako pozitivní a negativní kontrola. U každé upravené tkáně je životaschopnost buněk vyjádřena jako procento průměru negativní kontrolní tkáně. Predikční model: Relativní životaschopnost upravené tkáně je měřena na konci expozice testované látky (ve 3.minutě a v 60.minutě, u anorganických kyselin navíc ve 240.minutě) za použití vitálního barviva MTT. Hodnota 50% životaschopnosti testovaného materiálu vůči negativní kontrole byla přijata jako hodnota hraniční pro rozdělení látek na látky leptavé ("corrosive") = C a neleptavé ("non-corrosive") = NC.

Predikční model pro anorganické kyseliny

Reference